Biuret法是一種常用的蛋白質含量測定方法,通過其與(yu) 蛋白質結合產(chan) 生的顏色反應來測定蛋白質的含量。
樣品製備:首先,需要將待測的蛋白質樣品製備成適當的溶液。通常情況下,將蛋白質溶解在適當的緩衝(chong) 液中,以確保反應的穩定性和準確性。
加入試劑:將樣品溶液加入到含有Biuret試劑的試管或反應皿中。Biuret試劑通常由堿性銅溶液和鈉鉀氫氧化物組成。
反應產(chan) 生:當蛋白質與(yu) Biuret試劑反應時,會(hui) 產(chan) 生紫色的絡合物。這是因為(wei) 蛋白質中的蛋白質質量大約為(wei) 200個(ge) 氨基酸殘基,而Biuret試劑中的銅離子與(yu) 蛋白質中的兩(liang) 個(ge) 或更多的肽鍵結合形成絡合物,從(cong) 而產(chan) 生紫色的化合物。
測定吸光度:將反應產(chan) 物的吸光度測定在特定波長下,通常在540nm左右。吸光度與(yu) 蛋白質的濃度成正比,因此可以通過吸光度的測定來間接測定蛋白質的含量。
對照標準曲線:為(wei) 了確定樣品中蛋白質的含量,通常需要製備一係列已知濃度的蛋白質標準溶液,測定它們(men) 的吸光度,並繪製標準曲線。然後,將待測樣品的吸光度與(yu) 標準曲線進行比較,從(cong) 而確定樣品中蛋白質的含量。